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胆木药材的指纹图谱研究

时间:2022-04-30 15:10:34 好文 我要投稿

胆木药材的指纹图谱研究

  1、仪器与试药

胆木药材的指纹图谱研究

  Waters 515高效液相色谱仪;国家药典委员会2004年A 版“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”。色谱纯甲醇,试验用水为纯净水,其他试剂均为分析纯。异长春花苷内酰胺对照品(中国药品生物制品检定所,110831-200302);胆木药材共10批,采自海南五指山地区栽培地不同区域,经中国医科院兴隆分所陈伟平教授鉴定。

  2、方法与结果

  2.1 色谱条件色谱柱为Diamonsil TM C18(250 mm×4.6 mm,5 μm);检测波长为227 nm;柱温为30℃;流动相为甲醇-0.10%磷酸水溶液,二元梯度洗脱,洗脱时间为70 min, 流速为1.0 ml/min;进样量为20 μl,所有组分在70 min内出峰完毕。梯度洗脱条件见表1。

  2.4 指纹图谱的建立、分析与评价

  2.4.1 指纹图谱的建立

  按照供试品溶液制备方法将10批药材制备成供试品溶液,分别进样检测,测定所有供试品溶液的HPLC色谱图。根据10批次供试品测定结果所给出的`峰数、峰值(积分值)和相对保留时间等相关参数,进行分析、比较,制定优化的指纹图谱。见图1。

  2.4.2 共有峰确定

  根据10批胆木供试品的检测结果,比较色谱图。选择胆木供试液图谱中峰面积较大、峰形较好的色谱峰作为共有峰,共8个(见图2),其中7号峰为异长春花苷内酰胺(为胆木药材主要成分),其峰面积约占总峰面积70%,峰形稳定,可将该峰作为参照峰。

  2.4.3 共有峰相关信息

  根据10批胆木样品的色谱图结果,以7号峰作为参照峰,计算各共有峰相对保留时间,结果RSD<2.0%(见表2)。8个共有峰其峰面积总和占总峰面积平均百分比为93%。以参照峰峰面积为基准,计算各共有峰峰面积与参照峰峰面积的比值,共有峰面积比值基本固定。结果见表3。均符合指纹图谱的要求。表2 共有峰相对保留时间(略)表3 共有峰的峰面积与参照峰面积比值(略)

  2.4.4 指纹图谱相似度评价

  本实验记录了10批海南五指山地区不同区域胆木药材的指纹图谱(见图3)。将测试数据导入国家药典委员会2004年A 版“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”进行数据处理。得到胆木药材指纹峰共有模式R(见图3);与共有模式比较,10批海南五指山地区不同区域胆木药材的指纹图谱相似度分别为0.994,0.995,0.996,0.995,0.994,0.982,0.990,0.989,0.996,0.998。 检测波长的确定在对供试品溶液进行HPLC分析的同时,对紫外检测波长进行了筛选,发现在227 nm处胆木药材各色谱峰分离度较好,且主要活性成分异长春花苷内酰胺有较强的吸收,故选择227 nm作为指纹图谱的检测波长。