2017年执业药师《药物分析学》备考：分光光度法

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　　第一节可见—紫外分光光度法

　　掌握可见--紫外分光光度法的基本原理和测定方法。掌握可见—紫外分光光度法在药物鉴别、检查和含量测定中的应用。熟悉仪器的校正和检定方法;紫外吸收光谱与物质结构的关系。了解紫外分光光度计的基本结构。

　　一、基本原理

　　波长200～400nm范围称为紫外光区，400～760nm称为可见光区。物质吸收紫外和可见光区电磁波而产生的吸收光谱称为紫外-可见吸收光谱。

　　1.光源：紫外光区通常采用氢灯或氘灯，可见光区采用钨灯。

　　2.吸收池：玻璃池适用于370nm以上的可见光区，石英池适用于紫外、可见光区，通常仅在紫外光区使用。

　　三、紫外吸收光谱与物质结构的关系：紫外—可见吸收光谱属分子吸收光谱，是由分子的外层价电子跃迁产生的，也称电子光谱。它与原子光谱的窄吸收带不同。每种电子能级的跃迁会伴随若干振动和转动能级的跃迁，使分子光谱呈现比原子光谱复杂得多的宽带吸收。

　　当分子吸收紫外—可见区的辐射后，产生价电子跃迁。这种跃迁有三种形式：

　　(1)形成单键的σ电子跃迁。(2)形成双键的π电子跃迁。 (3)未成键的n电子跃迁。

　　通常，未成键的孤对电子较易激发，成键电子中π电子较相应的σ电子具有较高的能量，反键电子则相反。故简单分子中n→π* 跃迁需能量最小，吸收带出现在长波方向;n→σ*及n→π* 跃迁的吸收带出现在较短波段;σ→σ*跃迁吸收带则出现在远紫外区。

　　例题：物质分子吸收紫外光后，电子跃迁的类型为：A. n→σ* B. n→π* C. π→π* D. σ→σ* E .σ→π* 答案ABCD

　　四、吸收度的测定方法

　　1.对溶剂的要求：能充分溶解样品，与样品无相互作用，挥发性小，在测定波长处的吸收要符合要求。

　　2.空白对照实验：将配制溶液用溶剂(空白溶液)装入参比池里，调节仪器，使吸收度为0，去除溶剂和容器吸收、光散射。反射的影响。

　　3.测定波长确证：为提高测定方法灵敏度，减少测定误差，吸收度一般在λmax处测定。

　　4.供试品溶液浓度：使吸收度在0.3～0.7范围内。

　　5.仪器的狭缝宽度：以减少狭缝宽度时，供试品溶液吸收度不再增加为准。

　　五、应用

　　1.鉴别：(1)对比吸收光谱特征参数：核对供试品溶液λmax、、A是否符合规定。可同时用几个峰位作为鉴别依据

　　(2)比较吸收度比值的一致性：吸收峰较多时，规定几个波长处吸收度比值作为鉴定标准

　　(3)对比吸收光谱一致性

　　2.杂质检查

　　药物在紫外-可见光区有明显吸收，而杂质吸收弱;或杂质有明显吸收而药物无吸收，可通过控制吸收度限度来控制杂质量。

　　3.含量测定

　　(1)对照品比较法：供试品溶液和对照品溶液浓度及测定条件应尽可能一致

　　(2)吸收系数法：需对仪器进行严格校正和检定

　　(3)计算分光光度法：通过数学处理消除样品中干扰组分的干扰

　　第二节荧光分析法

　　了解荧光分析法的基本原理和应用;荧光光度计的基本结构。

　　一、基本原理

　　荧光的产生：此化学物质能从外界吸收并储存能量(如光能、化学能等)而进入激发态，当其从激发态再回复到基态时，过剩的能量可以电磁辐射的形式放射(即发光)。荧光发射的特点是：可产生荧光的分子或原子在接受能量后即刻引起发光;而一旦停止供能，发光(荧光)现象也随之在瞬间内消失。

　　发射荧光的光量子数亦即荧光强度，除受激发光强度影响外，也与激发光的波长有关。各个荧光分子有其特定的吸收光谱和发射光谱(荧光光谱)，即在某一特定波长处有最大吸收峰和最大发射峰。选择激发光波长量接近于荧光分子的最大吸收峰波长，且测定光波量接近于最大发射光波峰时，得到的荧光强度也最大。

　　物质的激发光谱和荧光发射光谱，可以用作该物质的定性分析。当激发光强度、波长、所用溶剂及温度等条件固定时，物质在一定浓度范围内，其发射光强度与溶液中该物质的浓度成正比关系，可以用作定量分析。荧光分析法的灵敏度一般较紫外分光光度法或比色法为高，浓度太大的溶液会有“自熄灭”作用，故荧光分析法应在低浓度溶液中进行。

　　二、荧光分光光度计

　　激发光源→激发光单色器→样品池

　　↓

　　发射光单色器→检测器→数据记录处理

　　样品池用低荧光材料制成，四面透光，发射光方向与激发光成直角。

　　三、应用：荧光分析可用于鉴别和含量测定。一般采用对照品比较法测定含量，灵敏度高、选择性好，但干扰多、线性范围窄，多用于需要高灵敏度和允许较大变异性的样品分析。

　　第三节红外分光光度法

　　熟悉红外分光光度法的基本原理以及在药物鉴别、检查中的应用。

　　了解红外光谱仪的基本结构。

　　一、基本原理

　　红外光谱是由分子的振动、转动能极引起的光谱。当用一定频率的红外光照射某物质分子时，若该物质的分子中某基团的振动频率与它相同，则此物质就能吸收这种红外光，使分子由振动基态跃迁到激发态。其条件为：

　　1即分子振动必须伴随瞬时偶极矩的变化。